阵发性睡眠性血红蛋白尿症检测-流式细胞术应用(二)

阵发性睡眠性血红蛋白尿症介绍

阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)是一种后天获得性造血干细胞克隆性疾病，其发病机制是由于磷脂酰肌醇聚糖A(PIG-A)基因突变引起血细胞糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚连蛋白缺失，导致血细胞对补体敏感性异常增高，从而引起血管内溶血、血栓、甚至骨髓衰竭。典型的PNH以慢性血管内溶血、血红蛋白尿及含铁血黄素尿为主要表现，但大多数患者常不典型，发病隐袭，国内总结203例PNH患者，首发症状为贫血占56.7%，血红蛋白尿仅占12.8%，黄疸兼贫血占5.9%。

PNH属于罕见病，目前统计的每年新发病例数约为2-5/百万。本病发病高峰年龄在20～40岁之间，男性显著多于女性。本病虽为良性疾病，有一半患者确诊后，生存期在10年以上，但起病急骤、病情反复、迁延不愈，患者生存质量差。

PNH分型

国际PNH工作组将PNH分为三类：

①经典PNH：存在PNH克隆，同时有溶血和(或)血栓的临床表现并除外其他骨髓衰竭性疾病(BMF)；

②BMF伴PNH克隆：如再生障碍性贫血(AA)或骨髓增生异常综合征(MDS)等；

③亚临床型PNH：有少量或微量PNH克隆，但没有溶血或血栓形成的临床或实验室证据。

PNH采用流式细胞术检测的临床意义

由于流式细胞术可以检测不同血细胞群体GPI锚连蛋白及锚的缺失、精确量化PNH克隆的大小及其特性，同时对PNH小克隆的检出具有较高的灵敏度,成为当前PNH检测的金标准。流式细胞术检测不仅可以对PNH进行分型，确定疾病的发展程度，帮助临床医生选择最佳的治疗方案，还可以监测病情进展及疗效。

PNH的流式细胞术检测方案

1.流式细胞术检测红细胞PNH克隆

红细胞上用于PNH检测的锚连蛋白主要是CD59和CD55，由于CD59表达量高，与其他抗原相比，更容易鉴别正常细胞(I型细胞)、部分缺失(Ⅱ型细胞)和完全缺失(Ⅲ型细胞)的PNH细胞。而CD55在红细胞的表达较低，已不建议使用CD55进行临床检测。高敏感检测同时需要增加CD235a作为设门抗体,以减低非特异干扰。荧光素的选择上，推荐使用CD235a-异硫氰酸素(FITC)，CD59-藻红蛋白(PE)。

2.流式细胞术检测白细胞PNH克隆

检测白细胞GPI相关锚蛋白最好的试剂为嗜水气单胞菌溶素变异体(FLAER),应选择适当的锚连蛋白抗体同时与FLAER及设门抗体联合应用。粒细胞和单核细胞上的GPI锚连蛋白主要选用CD24和CD14。CD157同时表达于单核细胞和中性粒细胞，可代替CD14和CD24。对粒细胞检测推荐采用FLAER和CD24或CD157，单核细胞则采用FLAER和CD14或CD157。设门抗体的选择上，CD15是粒细胞通用的抗体,对于单核细胞的设门标志的选择，国际上推荐CD64，但国内研究发现，当采用CD45、CD33和CD15同时进行粒细胞及单核细胞设门仍然有很好的可行性(表1)。

资料来源于：中国生物工程学会细胞分析专业委员会, 中国免疫学会血液免疫分会临床流式细胞术学组, 中华医学会血液学分会红细胞学组. 阵发性睡眠性血红蛋白尿症流式细胞术检测中国专家共识识[J]. 中华血液学杂志,2021,42(4):281-287.

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参考文献

[1] 中国生物工程学会细胞分析专业委员会, 中国免疫学会血液免疫分会临床流式细胞术学组, 中华医学会血液学分会红细胞学组. 阵发性睡眠性血红蛋白尿症流式细胞术检测中国专家共识识[J]. 中华血液学杂志, 2021, 42(4):281-287.

[2] Dalal BI, Khare NS. Flow cytometric testing for paroxysmal noctumal hemoglobinuria: CD64 is better for gating monocytes than CD33[J]. Cytometry B Clin Cytom, 2013, 84(1):33-36.

[3] 袁晓英, 王亚哲, 石韦华, 等. 流式检测PNH克隆的方法学探讨及临床筛检和意义[J]. 中国生物工程杂志, 2019, 39(9):33-40.

[4] Sutherland DR, Illingworth A, MarinovI, et al. ICCS/ESCCA consensus guidelines to detect GPI-deficient cells in paroxysmal noctumal hemoglobinuna (PNH) and related disorders part 2-reagent selection and assay optimization for high-sensitivity testing[J]. Cytometry B Clin Cytom, 2018, 94(1):23-48.