标记抗体流式检测标准操作规程

1   目的

     建立标记抗体流式检测的标准操作规程，规范操作过程，保证实验结果的准确性。

2   适用范围

     适用于本公司标记抗体流式检测的操作。

3   术语和定义
     标记后的抗体仍保持与相应抗原结合的能力，在荧光灯源的激发下产生荧光，通过流式细胞仪分析，可对相应抗原进行定性、定量或定位的检测。

4   职责和权限

5   内容

5.1 仪器装置：流式细胞仪（BDcalibur , ACEA ）、离心机。

5.2 耗材：移液枪及枪头（1ml , 100ul , 10ul）、流式上样管。

5.3 试剂：细胞株/ 外周血/骨髓、溶血素，蒸馏水，PBS。

5.4 实验步骤

5.4.1 根据送检样本取一定数量的流式管，一管成品抗体对照试剂。

5.4.2 每管加入标记抗体2ul，对照管按照对应的试剂说明加样，加入样本（细胞或血液）50 ul, 避光孵育15min。

5.4.3 加入溶血素根据溶血素厂家操作方法使用。

5.4.4 离心 300g * 5min 弃上清。

5.4.5 用PBS洗涤一次，离心300g * 5min弃上清。

5.4.6 加入400ulPBS，混匀，上机检测。

5.5 结果分析

5.5.1 表达细胞表型是否正确；

5.5.2 表达比例和对照比例；

5.5.3 SI表达是否与对照一致